你知道ELISA進(jìn)行方法學(xué)開(kāi)發(fā)時(shí)的基本原則嗎？
 
 對(duì)于親和力測(cè)定方法和原理的概述，讀者可參考生物功能學(xué)篩選評(píng)價(jià)技術(shù)之親和力評(píng)價(jià)篇。
 
 本文主要對(duì)飽和濃度法進(jìn)行概括。
 R代表受體或抗原，L代表配體或抗體。
 采用飽和濃度法，如果要測(cè)定配體相對(duì)于受體的親和力，少量R存在的情況下，將L進(jìn)行梯度稀釋，檢測(cè)R-L復(fù)合物的濃度，當(dāng)R-L復(fù)合物的濃度占總R濃度的一半時(shí)，L對(duì)應(yīng)的濃度值（EC50）即L相對(duì)于R的KD值。
 
 RL復(fù)合物/R即B值可用檢測(cè)的信號(hào)值代替，梯度稀釋的L和信號(hào)之間的函數(shù)關(guān)系滿足下面的公式，只有在此在特定的實(shí)驗(yàn)條件下EC50值能夠等價(jià)于KD值。
 
 飽和濃度法測(cè)定KD值有幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，即相互作用的兩個(gè)分子，R要少量，L要進(jìn)行連續(xù)的梯度稀釋，需要得到*大的信號(hào)響應(yīng)值（所有的R的結(jié)合位點(diǎn)被L占據(jù)）即平臺(tái)期，那么在此條件下，占據(jù)一半R時(shí)，所需要的L濃度（EC50）為KD值。
 
 飽和濃度法主要測(cè)定的是代表RL復(fù)合物的信號(hào)值，測(cè)定方法可以是流式細(xì)胞術(shù)、同位素標(biāo)記術(shù)、熒光偏振，也可以是ELISA。